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常见生物检材的提取的方法

发布时间:2014-02-04 00:00:00      发布人:   浏览量:234

常见生物检材的提取的方法

(一)血液及血痕的提取
1.各种纺织物品上的遗留血痕,小件上的可以整件提取。如不便整件提取或血痕附在较大件的纺织物品上,可以将血痕剪下送检,并记录其所在部位。
2.树叶、草叶、禾杆等小件载体上附着的血痕均可以整件提取送检。较大的木质类载体上的血痕,可根据载体的情况采取切削薄片状部分或锯掉端、角处等方法提取有血部位的检材。
3.光滑水泥地面、铁木器具、漆面上、玻璃上、陶瓷、塑料、光洁的金属物品等质地致密的载体上的血痕检材,除附在较小、易于提取的物品上可以整件包装送检,否则均需要擦拭或刮取。擦拭方法是根据血量的多少,准备适量的纱线或棉签,用蒸馏水浸润(不要留多余水分)后仔细擦拭血痕,将血痕全部转移,阴凉处晾干。记录提取部位后包装送检。
4.质地松软的载体如沙灰墙、泥土中的血痕的提取:将血痕尽量全部提取并尽可能少混带载体物质。如果沙灰墙上的血痕只能刮下送检,刮下的时候应尽量将全部血痕刮下不混或少混沙灰。泥土上血痕尽量挖出带血的完整土块,勿使土块破碎,包装勿挤压冲撞。
5.较小凶器上血痕应整件送检或分段提取,较大凶器上血痕可按在较硬载体上的血痕提取法提取血痕,分段提取,并记录提取部位。
6.身体上附着血痕的提取:在皮肤表面的血痕可以用纱线转移提取;在指甲缝中的血痕、组织提取送检时,可将指甲小心剪下,分别包装送检。
7.有关人员的对照血样的提取:可从耳垂、指尖或静脉取血,直接涂于干净纱布、滤纸或其它认可采血材料上,阴凉处晾干,做好标签后送检。
8.在尸检时提取尸体血样,未腐败尸体取心腔血,腐败尸体取末梢静脉血,涂在纱布上制成血斑。
9.通过血液检验鉴定亲子关系,取未稍血制成血斑即可。
10.在发生案件现场留有尚未干固的血迹,用纱布直接提取,阴干。

(二)精斑的提取
1.衣物、被褥等各种织物及卫生纸上遗留的可疑精斑提取的方法与相同载体上血痕的提取相一致,注意做好记录。
2.被害人阴道内、外的精斑的提取一般用纱布块、棉球擦取。纱布块不要太大,提取时需注意先外后内,分段提取。检材提取后于阴凉处晾干,做好记录后送检。
3.野外强奸现场的精斑常遗留在树枝、草、禾杆等植物或土地上。在植物上的取整件或取精斑遗留处的枝段送检,遗留在土地上的按遗留在土地上的血痕的提取方法提取。
4.遗留在较硬载体上的精斑提取法与血痕提取法相同。
5.涉嫌强奸的案件在送检精斑时需提取被害人、嫌疑人及有关人员(丈夫)等的血斑一并送检。
6.可疑口交或鸡奸案件的活体和尸体均用纱布块擦拭口腔或直肠提取,阴凉处晾干,装入标准的物证袋内。
7.对强奸案的犯罪嫌疑人可以用湿润纱布或棉拭子擦拭阴茎或提取犯罪嫌疑人的内裤等。
8.留有精斑的衣物已浸泡在水中,尚未清洗的,亦应提取晾干送检。

 

(三) 唾液斑提取
1.新鲜唾液的提取:让提供唾液者清水漱口后目视酸性果品,待唾液自然流出1~2mL,收集在洁净的试管或小烧杯内,置冰冻保存,做好标记。
2.唾液斑提取:或按前述方法将提取的唾液用纱布吸敷后自然晾干,或唾液供者清水漱口后取5×5平方厘米纱布块放入口中,待其浸湿后取出晾干,装入物证袋。
3.烟蒂提取:发现可疑烟蒂均应用镊子提取,按不同提取部位分别装入物证袋,做好标记。
4.对可疑的用于堵嘴的手帕或衣物等均应整件提取,如有湿润部位,应晾干后包装送检。
5.对尸体或活体皮肤等留有咬痕或可疑被舔吻部位,可先用湿的棉拭子或纱布擦拭,再用干棉拭子或纱布擦拭相同部位,晾干,该两份提取物应装入同一物证袋,这是典型的两步擦拭法。
6.犯罪分子用过的可疑口杯、茶具等均可用两步擦拭法擦拭其边缘部位,或直接送检。
7.信封口或邮票背面可疑遗留唾液斑时,对该信封和邮票整件提取,装物证袋,送检。

(四) 尿斑的提取
1.遗留在衣物、被褥等各种织物上的可疑尿斑的提取法与遗留在相同载体上血痕的提取法相同,同时也需要提取空白检材。
2.遗留在土地上的尿斑的提取是将被尿液浸透的泥土挖下装入瓶内,做好标签并同时提取空白泥土检材一并送检。未干的泥土检材需在冷环境送检。
3.遗留在容器中的尿液的提取是将尿液装入干净玻璃瓶中,并需在冷环境下送检。

(五)毛发的提取
不管是遗留在何处的毛发(身上、地上、衣物上、凶器上等等)一经发现分别提取,装入纸袋同时做好记录。严禁不同部位毛发混在一起。提取时应注意细心查找,提取动作轻柔,避免将粘附在载体上的毛发拉断,也防止将毛发上的附着物擦掉。如果毛发在载体上粘附较紧,有可能时将载体一同提取。

(六) 软、硬组织提取
1.离体的人体小块内脏或肌肉皮肤等均应整块提取,分别装入洁净的试管或瓶内,冷冻存放做好标记。干燥的小块组织可装入纸袋,低温存放;大块组织可切下30g重的检材送检,其余部分冻存。
2.粘附有灰、土、油迹等小块软组织应同时提取粘附的空白物做对照检验用。
3.附有软组织的小骨片可连同软组织一并提取,冷冻存放。
4.对发现较多的白骨化骨骼,可全部提取,装入洁净的塑料袋或木箱内,喷洒消毒防腐剂。取其中长骨、牙齿等根据案情需要分别送检不同部位骨骼。

(七) 鼻涕(斑)、痰液(斑)提取
1.留在卫生纸上或手帕上的鼻涕斑及痰液斑可整件提取,做好标记,纸袋包装送检。
2.留在现场地面上的鼻涕斑迹或痰液斑迹,在湿润时可以用纱布擦拭提取;如斑迹干燥可以刮取,包装送检。
3.留在衣物上的鼻涕斑或痰液斑,可以剪下斑迹,晾干后送检。

(八) 呕吐物提取
提取现场上留下的呕吐物50g装入洁净瓶内,冷冻存放备检。尸检时取相同量的胃内容物冷冻存放备检。

(九) 脱落上皮细胞、接触DNA提取
主要指指印、皮肤脱落上皮细胞提取。皮肤占人体重量15%,是人体更大的器官。人皮肤1月更换1次,每天大约脱落400,000个细胞。皮肤每平方厘米含有100个湿腺,10个油腺,腺液分泌时也同时含有较多量代谢细胞。
指印提取前应制定提取计划,防止提取时吹走指印内细胞。指印提取时先用湿棉签轻擦,再用干棉签轻擦,阴干保存。用力擦取同时可以提取到指印附着基质内不必要抑制剂。
脱落上细胞提取及接触DNA提取原则:
1.防止污染是首要任务,尤其是现场指挥人员、现场勘查人员及实验室检验人员的污染。
2.分别包装,细心保存,及时送检。

(十)对照样本提取及注意事项
1.口腔擦试物 用棉签擦拭口腔粘膜,优点是无创性。一般2个棉签即可。口腔擦拭提取时一定要用清水先行嗽口。
2.血斑 更好抽取未稍静脉血涂于滤纸上,优点是易于定量,也可涂于纱布上。抗凝剂与血的比例关系:0.5M EDTA pH8.0:血=15μl:1ml,2.5%枸橼酸纳:血=1:4。肝素可抑制PCR反应,一般不用肝素抗凝。
刺取耳血及手指血涂于滤纸或纱布上也可。涂制血斑大小为4平方厘米。
用血斑做为样本,采血时千万应采用一次性针头、针管、采血针等,防止传染疾病。
3.对照样本还可提取毛囊、毛干、肌肉组织、指甲、骨胳等人体组织,视案件情况而定。
4.一般提取直接当事人上述检材做为对照样本,有时在直接当事人缺失的情况下,也采取直接当事人的直系亲属——父母、子女、舅姨、姑叔等的检材做为对照样本。
5.不管是对照样本或者现场生物检材,在提取后一定应阴干,阴干是检材提取之后最最重要的一个环节。
不应未阴干就置于塑料等不透气包装袋盒内!
不应烤干或晒干!
不应相互污染!

(十一)流产、引产胎儿亲子鉴定检材提取
1.有关胎儿的几个概念
① 二月龄胎儿长1.5-2.0cm
三月龄胎儿长6.0cm
② 胎盘构成
羊 膜
→ 与胎儿DNA完全相同(包括羊膜细胞)
绒毛膜
底蜕膜 与母亲的DNA完全相同。
满月胎盘长15-20cm,重0.5kg。
胎盘胎儿面光滑,灰兰色。胎盘母体面粗糙,暗红色。
③脐血与羊水细胞:与胎儿DNA完全相同。
2.为了进行亲子鉴定,应用洁净器皿收集人流门诊的亲子鉴定流产物,更好全部冷冻后全部送检,因为二月龄胎儿长仅1.5-2.0cm,在人流过程中还有损坏,与人流组织混在一起,很难区分,所以应全部冷冻后全部送检。绝不允许用福尔马林固定后送检。
3.亲子鉴定送检检材
①(嫌疑)母血斑
②子、女血斑或组织
③(嫌疑)父血斑

(十二)癌症、骨髓移殖及输血患者样本提取
癌变影响DNA图谱,所以癌症患者有关检材进行DNA检验时应慎重。患有口腔癌的个体其口腔擦拭物不能用作标准对照样本。
输血患者血液DNA图谱变化与一次输血量及采血时间有关,为了慎重起见,可分阶段重复抽血检验。骨髓移殖后患者口腔擦拭物等一般表现为移植前DNA图谱,血液则表现为供体DNA图谱或者供受体混合图谱,有时会有额外等位基因。骨髓移植提取生物检材包括供受体末梢血、口腔擦拭物、毛根等,应综合分析检验结果。

(十三)腐败尸体生物检材提取
尸体腐败后不同组织Amel及STR位点检验成功率不同,成功率由高到低顺序依次为软骨(肋软骨)→指甲近端→指甲远端→肌肉→头皮→血纱。
实际案件中提取尸体腐败组织的顺序为血纱→肌肉→指甲→软骨,原则是尸体解剖的难易程度及对尸体腐败程度的判断。如果实在难于判断提取何种组织为好,则应全提上述尸体组织。在不影响以后的解剖学、组织学、损伤学、颅像重合、面貌复原检验分析的前提下,在理顺各种关系后,必要时应提取骨骼及牙齿,因为骨骼及牙齿保存DNA时间较所有组织均长。

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