GFP/RFP/BFP/YFP荧光蛋白用什么激发光源？
四种荧光蛋白的激发与观察配置：GFP用蓝光488nm配黄镜，YFP用青光514nm配桔镜，RFP用绿光558nm配红镜，BFP用紫外或紫光配透明镜。
核心要点
- GFP：激发 488nm 蓝光，发射 508nm，配 LUV-30A 黄色眼镜
- YFP：激发约 514nm 青光，发射约 527nm，配 LUV-40A 桔色眼镜
- RFP/DsRed：激发约 558nm 绿光，发射约 583nm，配 LUV-50A 红色眼镜
- BFP：激发约 380nm 紫外，发射约 446nm，配 LUV-10A 透明防护镜
- CFP：激发约 433nm 紫光，配 LUV-20A 青色镜
- 眼镜与滤镜要按发射波长配对，颜色错了背景会发亮
按发射波长配对就行：GFP 蓝光激发配黄镜、YFP 青光配桔镜、RFP 绿光配红镜、BFP 紫外配透明镜。荧光蛋白家族越扩越多，但只要抓住"激发靠近吸收峰、观察镜挡住激发光"这两条，选型不会错。
GFP绿色荧光蛋白的发现为生物工程研究带来极大的便利，在GFP绿色荧光蛋白后，陆续又有了红色荧光蛋白RFP，蓝色荧光蛋白BFP，黄色荧光蛋白YFP……
绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein，GFP）来自维多利亚水母，是荧光蛋白中应用最多的一种。GFP可在508nm处自行发射绿色荧光，无需辅助因子和底物。将GFP基因插入质粒作为一种手段，可以达到许多功能目的。
红色荧光蛋白（red fluorescent protein，RFP）是一种荧光团，在激发时会发出红橙色荧光。人们利用定向诱变技术开发了几种变体。最初的变体是从Discosoma中分离出来的，名为DsRed。红色荧光蛋白RFP约为25.9kDa。现在，红色荧光蛋白还有其他变体，它们发出橙色、红色和远红色荧光。
黄色荧光蛋白（Yellow Fluorescent Protein，YFP）可以看做绿色荧光蛋白的一种突变体，最初来源于维多利亚多管水母（Aequorea victoria）。相对于绿色荧光蛋白，其荧光向红色光谱偏移，而这主要是由于蛋白203位苏氨酸变为酪氨酸。其激发峰值波长为514 nm，发射峰值波长为527 nm。
在基因编辑研究中，我们常用激发光源激发荧光蛋白发出荧光做相应的标识或表达，那么这些常见的荧光蛋白激发光源是哪些呢？
选择正确的激发光源，首先得知道荧光蛋白在什么样的激发波长下会发出荧光，即激发波长。常见荧光蛋白激发波长如下：
- 红色荧光蛋白RFP：激发波长532nm（绿光），发射波长588nm；
- 绿色荧光蛋白GFP：激发波长为488 nm（蓝光或紫光），发射波长507 nm；
- 蓝色荧光蛋白BFP：激发波长在400nm（紫光）左右，发射波长在450nm左右；
- 黄色荧光蛋白YFP：激发峰值波长为514（绿光）nm，发射峰值波长为527 nm。
路阳仪器上海公司生产的荧光蛋白激发光源，有单波长激发光源（绿光/紫外线/蓝光等），双波长激发光源（紫外+蓝光，绿光+蓝光等），多波长激发，样式有手电筒式，手持式，桌面式……更多关于激发光源，请咨询路阳仪器上海公司。
四种常见荧光蛋白的光谱参数
| 蛋白 | 激发峰 | 发射峰 | 光源波段 | 观察眼镜 |
|---|---|---|---|---|
| GFP / eGFP | 488nm | 508 至 510nm | 蓝光 | LUV-30A 黄色 |
| YFP | 约 514nm | 约 527nm | 青光 | LUV-40A 桔色 |
| RFP / DsRed | 约 558nm | 约 583nm | 绿光 | LUV-50A 红色 |
| BFP | 约 380nm | 约 446nm | 紫外 | LUV-10A 透明 |
| CY3 | 约 550nm | 约 570nm | 绿光或 532nm | LUV-50A 红色 |
为什么不能一套配置看所有蛋白
荧光蛋白的斯托克斯位移（激发峰与发射峰之间的间隔）只有 20 至 60nm。如果用一个宽谱光源加一副眼镜去覆盖所有蛋白，激发光和发射光会重叠，背景压不下去，弱信号就被淹没了。所以每类蛋白都要"特定波段 + 对应截止波长的眼镜"，宁可多备两副镜片。
手持光源怎么选
只做 GFP 一个指标，选单波段蓝光机型即可（如 LUYOR-3260RB）；要同时看 GFP 和 RFP，选双波段机型（如 LUYOR-3415RG）；需要灵活换波段、做多种标记，选手电式荧光光源（如 LUYOR-3280GR），换滤光片即可切换波段。
常见问题
荧光蛋白的激发峰能改吗？
峰位由发色团结构决定，不能改。但通过突变可以造出不同颜色的变体（如 mCherry、mVenus），选型时按实际使用的变体查光谱。
同一份样品能做双标吗？
可以，前提是两个蛋白的发射峰间隔足够大（如 GFP 加 RFP），并用对应眼镜分别观察。间隔太近（如 GFP 加 YFP）很难分开。
能不能用蓝光同时激发 GFP 和 YFP？
能激发，但两者发射峰只差 20nm 左右，肉眼难以区分，需要靠滤镜或光谱拆分。
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上海路阳仪器有限公司. 《GFP/RFP/BFP/YFP荧光蛋白用什么激发光源？》[EB/OL]. 上海路阳仪器有限公司, 2024-10-28. https://www.luyor.net/jishujieda/260.html.
