为什么LUYOR激发光源的激发光和发射光和书本的不一样

我们经常收到咨询“你们有 488nm 的光源吗？”

咨询488nm 的光源的老师通常是:

• 他们正在使用 GFP（绿色荧光蛋白）;

• 他们咨询了同事或查看的文献，确定了GFP 的激发/发射值为 488/508 nm;

• 他们知道他们需要使用荧光，但他们并不真正了解它的工作原理细节;

• 他们了解到 LUYOR 提供荧光蛋白激发光源，他们想知道我们是否有针对他们特定应用的解决方案。

这个问题没有错。您可以在不了解荧光的情况下使用它。如果您需要选择使用荧光蛋白激发光源，那么查阅参考文献以获得指导，然后询问这些参考文献告诉您什么，这是完全合乎逻辑的。您会发现 GFP 的 488/508nm 是正确的——这些是激发GFP荧光和观察发射光的波长。

关于荧光激发工作原理，最相关的一点是，荧光激发或发射没有单一的波长。荧光物体可以在一定波长范围下被激发，由此产生的发射会延伸到一定波长范围内。这个范围称为激发光谱和发射光谱。

例如，下图中的曲线显示了最常用的荧光蛋白 eGFP（增强型 GFP）的激发和发射光谱。蓝色曲线是激发光谱，绿色曲线是发射光谱。峰位于 488 nm 和 508 nm，正是表格告诉您它们应该在的位置。488nm 是激发eGFP的最有效波长，但它肯定不是**可以激发荧光的波长。

GFP 激发和发射光谱

您可以将激发光谱看作各种波长的光对激发GFP荧光的相对效率的图表。如果 488nm 处的 100 个单位的激发光产生 x 强度的荧光，那么 450nm 处大约需要 200 个单位的光才能产生相同的强度，因为 450nm 光被吸收并产生荧光的可能性大约是 488nm 光的一半。但这并不意味着您不能使用 450nm激发光！

发射光谱的情况略有不同，因为您无法选择输出的波长。来自特定荧光团的荧光的性质是发射光谱与激发波长无关。也就是说，无论您在 440、450、460nm 等处激发，发射的光都将分布在相同的发射光谱上。激发光谱在选择激发荧光的光源时发挥作用。发射光谱有助于理解势垒滤波器的作用。

在理想的荧光蛋白激发光源系统中：

激发光源将尽可能靠近激发峰值来激发荧光

荧光滤光片将尽**努力传输发射光

激发光源和屏障滤光片协同工作，以消除任何激发光通过荧光滤光片或荧光观察眼镜。

在实际系统中，通常需要对光谱特性（激发和发射光谱）以及光源、滤光片和荧光观察眼镜的特性进行一些权衡。以上最后一点很关键 - 如果过多（或任何）激发光通过荧光观察眼镜，它会严重降低您看到所需荧光的能力，尤其是在荧光不是很强的情况下。

很大一部分挑战是由于许多应用（如 GFP）中使用的荧光团的激发和发射非常接近。这使得同时服务于所有三个要点的光源和滤光片配对变得具有挑战性，特别是当您试图以合理的价格组装一个强大的系统时。

为了满足所有这些要求，LUYOR的荧光蛋白激发光源通常在激发光谱的“肩部”激发，而不是在峰值处激发。远离峰为选择屏障滤光片提供了更多的“空间”，该滤光片 （a） 有效透射荧光发射，（b） 阻挡任何反射的激发光。在 GFP 的情况下，LUYOR的RB 光源主要在 440-460nm 范围内发射，该范围显示该范围能够激发 GFP 荧光，而成对的激发滤光片（截止波长约为 500nm 的长波通或带通 （500 – 560nm））可以很好地传输发射，同时在阻挡反射光方面做得很好， 实现良好的观看对比度。

我们希望这篇文章对您有所帮助，如果您有任何问题，可以联系我们。