使用LUYOR-3410紫外线灯观察PDMPO 荧光染料荧光

发布时间：2025-12-16 作者：上海路阳仪器技术文档组 点击次数：

本篇摘要

PDMPO 是溶酶体 pH 双激发双发射荧光探针（Abs 329nm，Em 440/540nm）。用 LUYOR-3410 高强度紫外灯激发，可在活细胞中区分弱酸性细胞器与酸性溶酶体，附滤光片与曝光参数建议。

核心要点

PDMPO 是一种溶酶体 pH 指示剂，也是常用的荧光酸性探针：吸收峰 329nm，发射峰 440nm 与 540nm，两个发射峰的强度比例随 pH 变化，因此在弱酸性细胞器中呈蓝色、在酸性更强的溶酶体中转为黄色。用高强度紫外灯激发，就能在活细胞里直接看到这种颜色差异。

PDMPO是一种溶酶体pH指示剂，是可用于荧光成像的荧光酸性试剂。PDMPO是研究活细胞酸性细胞器的有效工具。PDMPO表现出pH依赖性双激发和双发射光谱峰。PDMPO在弱酸性细胞器中产生蓝色荧光，在酸性更强的溶酶体中变为黄色。(Abs=329 nm；Em=440/540 nm)。

LUYOR-3410是一款便携式高强度紫外线灯，能够激发PDMPO荧光染料发出绿色荧光。LUYOR-3410便携式高强度紫外线灯内置了5颗大功率紫外线LED，能够发出10mW/cm²强烈紫外线，激发很多材料发出明亮荧光，是科研实验室常用设备。

PDMPO 属于双激发、双发射型 pH 探针。它在 329nm 附近有吸收峰，被激发后同时在 440nm（蓝）与 540nm（黄绿）两个波段发射，两个峰的相对强度取决于所处环境的 pH。pH 越低，长波发射占比越高，肉眼看到的就是从蓝到黄的渐变。

这种比例型响应比单一强度型探针更可靠：细胞厚度、染料浓度、激发光强波动会同时影响两个峰，取比值后大部分被抵消，因此适合做半定量的 pH 比较，也适合在共聚焦或宽场荧光显微镜下做比率成像。

PDMPO 的吸收峰在 329nm，属于 UV-B 边缘。实际实验中常用 365nm 长波紫外 LED 激发，虽然偏离吸收峰，但 LED 输出功率高、光谱窄，仍能得到足够亮的信号，而且比 329nm 光源更容易获得、对细胞的短波损伤也更小。

LUYOR-3410 便携式高强度紫外灯内置 5 颗大功率 UV-LED，输出约 10mW/cm²，适合培养皿、玻底皿、组织切片的整体照射激发，也可作为荧光显微镜外置激发光源使用。对光漂白敏感的长时间成像，建议降低占空比或加装中性密度片。

观察 PDMPO 需要两组发射滤光片：蓝通道用 420–460nm，黄绿通道用 500–560nm，激发端用 340–380nm 带通或 365nm 长通。两个通道分别曝光后，用 ImageJ 等软件取 ROI 的平均强度做比值，得到 pH 相对分布图。

信号弱：染料装载不足或激发光偏离吸收峰，可延长装载时间、提高染料浓度（注意毒性），或换用更高输出功率的紫外光源。

背景高：未结合的染料残留，加强洗涤；培养基或血清的自发荧光也会抬高背景，成像前可换无酚红培养基。

光漂白快：UV-A 长时间照射会加速探针淬灭，减少照射次数、降低光强、加抗淬灭剂都能缓解。

可以。PDMPO 吸收峰在 329nm，365nm 虽偏离峰值但仍在有效激发范围内；LED 光源功率高、光谱窄，实际信号通常足够，且短波损伤比 329nm 更小。

蓝色（440nm 为主）对应 pH 相对较高的弱酸性细胞器，黄色（540nm 为主）对应酸性更强的溶酶体。判断时应以两个通道的强度比值为准，而不是只看单一通道的亮度。

常见原因是染料装载不均匀、细胞状态差异、照射时间不同导致光漂白程度不一致。建议同批实验统一装载时间、统一曝光参数，并设置阳性对照。