利用便携式激发光源观察毛状根荧光

发布时间：2024-09-04 作者：上海路阳仪器技术文档组 点击次数：

本篇摘要

便携式荧光蛋白激发光源观察毛状根 GFP 表达：LUYOR-3415RG 双波长手电筒配 LUV-495A 67 mm 滤光片（激发 440~460 nm、发射 500 nm），可在体视镜下无损观察转基因毛状根与幼苗。

核心要点

毛状根转化是基因功能研究的常用体系，GFP 阳性筛选需活体观察
LUYOR-3415RG 双波长输出，配 LUV-495A 滤光片即可观察 GFP
无需取样、无需切片，整株幼苗与根系可直接在体视显微镜下判读
多波段可选，覆盖 GFP、EGFP、YFP、BFP、RFP 等常见荧光蛋白

做毛状根转化，最费时间的环节往往不是转化本身，而是筛选：哪条根真的转进去了、表达强不强。传统的做法是取样、制片、上荧光显微镜，一套流程下来，材料也毁了。便携式激发光源给出的答案是——不用取样，直接照。

近日贵州师范大学生命科学学院在《BMC》期刊发表文献《Highly efficient Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation for functional analysis in woodland strawberry》，文献中实验采用 LUYOR-3415RG 便携式双波长荧光蛋白激发光源观察绿色荧光蛋白在毛状根的表达。

文献部分图片是采用 LUV-495A 拍照滤镜和 LUYOR-3415RG 激发光源。

文献部分内容：

Fluorescence observation of hairy roots. The visualization of GFP fluorescence in transgenic hairy roots was detected using a LUYOR-3415RG dual florescent protein flashlights with a filter cube LUV-495 A 67 mm, excitation wavelength 440–460 nm and emissions wavelength 500 nm (LUYOR, China). All explants, hairy roots, and seedlings were observed using a stereo microscope Olympus SZX16 (Olympus, Japan) equipped with a digital camera Olympus E-330.

文献下载地址：https://doi.org/10.1186/s13007-023-01078-y

LUYOR-3415RG 便携式双波长荧光蛋白激发光源也叫荧光蛋白观察手电筒，主要用于观察各种荧光蛋白在动植物体内的表达，有 365nm、405nm、455nm、505nm、530nm 等多种波段可选择，能够观察 GFP、EGFP、YFP、BFP、RFP 等各种荧光蛋白在植物叶片、愈伤、根系的表达，以及各种模式动物上的表达。

文献里的用法：双波长光源配 495 滤光片

贵州师范大学生命科学学院在《BMC Plant Biology》发表的森林草莓毛状根转化研究中，用 LUYOR-3415RG 双波长荧光蛋白激发光源观察 GFP 在毛状根中的表达，配合 LUV-495A 67 mm 滤光片，激发波长 440~460 nm、发射波长 500 nm；所有外植体、毛状根与幼苗都在 Olympus SZX16 体视显微镜下观察，并用 Olympus E-330 相机拍摄记录。

这套组合的逻辑很清楚：激发光源提供 440~460 nm 的蓝光，正好落在 GFP 的吸收峰附近；滤光片挡掉激发光、只让 500 nm 附近的发射光通过，于是在暗背景下看到的就是干净的绿色荧光，而不是一片蓝紫光。

为什么不取样直接看

毛状根的价值在于"活"。转化后的根系要继续培养、继代、做后续实验，取样制片等于把材料损耗掉。用便携光源加体视镜观察，可以在不接触、不离体的条件下判断哪条根发绿光，挑出来单独培养即可。

另一个好处是判读范围大：整皿根系、整株幼苗都能一眼扫过，弱表达的株系也不容易漏。对于需要筛几百上千个株系的转化实验，这个效率差别非常明显。

操作要点

暗环境：关掉室内照明，或用黑布罩住观察区，环境光会直接抬高背景；
滤光片要对准：滤光片装在镜头前或灯头前均可，关键是让激发光不进入成像光路；
距离与角度：光源斜 30~45° 照射，避免正反射进入镜头；
控制照射时间：长时间强光照射会引起荧光淬灭，观察与拍照尽量一次完成；
记录参数：光源波段、滤光片型号、曝光时间写进实验记录，便于复现。

常见问题

能观察哪些荧光蛋白？

3415RG 为双波长设计，配合不同滤光片可观察 GFP、EGFP、YFP、BFP、RFP 等常见荧光蛋白；选购时按目标蛋白的吸收/发射峰确定波段组合。

必须配体视显微镜吗？

不是必须。肉眼近距离观察可判断有无荧光与强弱；要看细胞级定位或拍照留证，配体视镜或宏观变倍镜头效果更好。

和荧光显微镜相比有什么优势？

荧光显微镜分辨率高但视场小、需要制片；便携光源视场大、可活体观察、成本低。两者是互补关系，筛选用光源、验证用显微镜。

为什么看到的荧光很暗？

常见原因是环境光太强、滤光片不匹配或光源距离太远。先在全暗条件下试，再逐步调整角度与距离。