激发光源用于观察荔枝愈伤的GFP表达
激发光源观察荔枝愈伤的 GFP 表达：中国热带农业科学院在荔枝胚性愈伤转化与 CRISPR/Cas9 基因编辑研究中，用手持式双波长光源（LUYOR 3415RG）检测抗性愈伤与体胚的 GFP 荧光。
核心要点
- 荔枝等木本果树转化周期长，需要可视化标记提前判断转化是否成功
- 潮霉素抗性筛选之后，用 GFP 荧光确认抗性愈伤是否真的表达
- 手持光源可在培养皿上直接观察，不必取样制片
- 愈伤与体胚两个阶段都可检测，配合 GUS 染色互为验证
木本果树的遗传转化是出了名的慢：转化、筛选、诱导愈伤、再生成苗，动辄大半年。如果等到成苗才做分子鉴定，一旦失败，前面的时间全部白费。所以研究者更愿意在愈伤阶段就用可视化标记确认——荧光一亮，心里就有底了。
近期中国热带农业科学院在《Horticultural Plant Journal》期刊上发表了题为《Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of embryogenic callus and CRISPR/Cas9-mediated genome editing in 'Feizixiao' litchi》文献，文献中采用了 LUYOR-3415RG 便携式双波长激发光源用于观察 GFP 绿色荧光蛋白在荔枝愈伤上的表达。
LUYOR-3415RG 便携式双波长激发光源照射荔枝愈伤，有绿色荧光蛋白的发出绿色荧光。
文献摘要：
The embryogenic callus was transformed under optimum transformation conditions. After the second round of Hyg screening, resistant yellow callus in 31.58% of the total transformed callus was selected and half was used to induce somatic embryos. Finally, histochemical staining of callus and somatic embryos for GUS gene expression determination and a hand-held lamp (LUYOR 3415RG, Shanghai, China) were used to investigate the expression and resulting fluorescence signals of GFP in resistant transgenic callus and somatic embryos.
文献地址：https://doi.org/10.1016/j.hpj.2023.01.011
LUYOR-3415RG 双波长荧光蛋白激发光源
LUYOR-3415RG 手持式荧光蛋白激发光源可检测转 GFP、eGFP、tdTomato、Cherry、DsRed、DAPI、Hoechst、CFP、BFP、YFP、Venus、Luciferase 等多种荧光蛋白的表达。激发光源激发出绿色荧光时，用黄色滤光镜观测，可检测含绿色荧光蛋白（GFP）的生物；激发光源激发红色荧光时，用红色滤光镜观测，可检测含红色荧光蛋白（DsRed）的生物。LUYOR-3415RG 双荧光蛋白激发光源用于检测、筛选转绿色荧光蛋白（GFP）和红色荧光蛋白（DsRed）基因的植物、动物及微生物，如水稻、玉米、斑马鱼、小鼠、细菌、真菌等等。LUYOR-3415RG 和 LUYOR-3430、LUYOR-3260 除了可用于筛选转基因生物外，还可以用于样本的预筛选、辅助解剖、用于珊瑚研究等。
文献里的用法
中国热带农业科学院在《Horticultural Plant Journal》发表的妃子笑荔枝研究中，用根癌农杆菌介导转化胚性愈伤，经两轮潮霉素筛选后，31.58% 的转化愈伤表现为抗性黄色愈伤，其中一半用于诱导体细胞胚。
为确认 GFP 是否真的表达，研究同时用了两种手段：组织化学染色检测 GUS 基因表达，以及手持式光源（LUYOR 3415RG，上海）观察抗性转基因愈伤与体胚的 GFP 荧光信号。两种标记互为验证，比单一标记更可靠。
为什么在愈伤阶段就要看荧光
抗生素筛选只能说明"细胞带着抗性基因活下来了"，不等于"目标基因在表达"。假阳性、沉默、嵌合体都可能存在。GFP 是蛋白层面的证据：哪里发绿光，哪里的细胞就真的在合成这个蛋白。
在愈伤阶段做这一步，好处是成本低、可重复：培养皿直接放灯下看，阳性团块用记号笔圈出来，单独继代；阴性团块及时淘汰，不再占用培养基与培养架空间。对周期长的木本材料，这种"早筛"能省下大量资源。
实操要点
- 暗背景：愈伤多为淡黄或白色，本身有一定自发荧光，环境光越暗对比越清楚；
- 滤光片：观察 GFP 用黄色滤光镜，挡住激发光；
- 角度与距离：光源斜 30~45° 照射，距离 20~30 cm，避免正反射；
- 对照：同时放一皿未转化愈伤作阴性对照，避免把自发荧光误判为阳性；
- 记录：拍照时固定光源位置与曝光，便于不同批次横向比较表达强度。
常见问题
愈伤本身会发荧光吗？
会有一定自发荧光，尤其培养较久的组织。务必设未转化对照，并注意荧光的颜色与分布是否与预期一致。
能直接看体胚和幼苗吗？
可以。同一支光源可观察愈伤、体胚、根、叶与幼苗，按材料大小调整距离即可。
GFP 和 GUS 染色要都做吗？
建议至少两种方法互证。GUS 需要破坏性染色，GFP 可活体观察，先看荧光再挑材料做染色，效率更高。
光源功率会不会灼伤组织？
短时间观察不会。避免长时间近距离直射同一团材料，需要细看时可采用间歇照射。
相关产品与延伸阅读
上海路阳仪器有限公司. 《激发光源用于观察荔枝愈伤的GFP表达》[EB/OL]. 上海路阳仪器有限公司, 2024-09-04. https://www.luyor.net/paper/45.html.
