激发光源用于小鼠肺部癌细胞的荧光观察
激发光源用于小鼠肺部癌细胞的荧光观察：重庆医科大学在黑色素瘤研究中用 LUYOR-3415RG 双波长光源配 LUV-50A 观察眼镜，对 RFP 标记的肺转移灶做整体荧光成像，无需解剖制片。
核心要点
- 活体转移实验需要在不牺牲动物的前提下判断转移灶多少
- RFP 标记肿瘤细胞后，用激发光源在体外直接观察肺部转移灶
- LUYOR-3415RG 双波长 + LUV-50A 观察眼镜，可在解剖台旁快速判读
- 整体荧光成像比切片计数快，且能保留组织做后续分子检测
研究肿瘤转移，最终要回答一个问题：肺里到底长了多少转移灶？传统做法是取肺、固定、切片、染色、显微镜下数，费时且只能取部分切面。如果肿瘤细胞本身带荧光，事情会简单很多——照一下就能看见。
2022 年 9 月重庆医科大学在《Biological Research》发表《Melanoma stem cells promote metastasis via exosomal miR-1268a inactivation of autophagy》文献，文献中实验采用了 LUYOR-3415RG 双波长荧光蛋白激发光源和 LUV-50A 荧光观察眼镜观察红色荧光蛋白 RFP 在小鼠肺部肿瘤细胞上的表达。
To study the effect of miR-1268a overexpression on OL cells metastasis in vivo, we generated OL cells stably overexpressing miR-1268a via lentiviral infection (Fig. 4J). 5×105 OE-NC-OL and OE-miR-1268a-OL cells were injected into NOD/SCID mice via the tail vein, respectively (Sect. "Materials and methods"). All mice were sacrificed at day 35 after tumor cell injection. Since OE-NC-OL and OE-miR-1268a-OL cells were RFP-labeled, macroscopic metastatic foci formed at the lung could be visualized under external fluorescence imaging using LUYOR-3415 Dual Fluorescent Protein Excitation Light Source and LUV-50A Glasses. As shown in Fig. 4K, injected OE-miR-1268a-OL cells produced significantly more macroscopic lung foci than the OE-NC-OL cells (n=6). Subsequently, H&E analysis was performed on the largest cross-sectional lung sections of the two groups of mice. Statistical analysis showed that there were significantly more microscopic metastatic foci in the lungs of mice treated with OE-miR-1268a-OL cells (The black arrows show the formed metastases) (Fig. 4L). These observations show that miR-1268a can enhance metastatic colonization efficiency of OL cells that are oligometastatic. So far, we have demonstrated that miR-1268a, transferred from OL-SCs-derived exosomes to OL cells, can effectively augment the clonogenic colonization capability of OL cells to give arise to more extensive macroscopic metastases.
文献地址：https://biolres.biomedcentral.com/articles/10.1186/s40659-022-00397-z（DOI: 10.1186/s40659-022-00397-z）。
该类双波长激发光源适用于小动物活体成像、GFP/RFP 荧光蛋白表达观察、肿瘤转移灶示踪等科研场景。
文献里的用法
重庆医科大学 2022 年发表在《Biological Research》的研究，探讨黑色素瘤干细胞通过外泌体 miR-1268a 抑制自噬而促进转移的机制。体内实验中，研究者用慢病毒感染构建稳定过表达 miR-1268a 的 OL 细胞，尾静脉注射 5×10⁵ 个细胞到 NOD/SCID 小鼠体内，35 天后处死。
由于这些细胞带 RFP 标记，肺部的宏观转移灶可以在整体荧光成像下直接观察：使用 LUYOR-3415 双波长荧光蛋白激发光源配 LUV-50A 观察眼镜，即可看到肺表面的红色荧光灶。结果清晰显示，过表达 miR-1268a 的组别形成的转移灶显著更多。
为什么整体荧光成像好用
快：取肺后直接观察、拍照、计数，几分钟完成，不必等切片与染色。
全：切片只能看几个切面，容易漏掉小灶或边缘的病灶；整体成像看的是整个器官表面，计数更接近真实。
留样：观察完的组织仍可用于后续提取 RNA、蛋白或做病理，不影响分子检测。
可重复：同一批动物在实验中途也可做无创或微创观察，跟踪转移灶的生长趋势，而不必分批处死。
操作要点
- 配滤光眼镜：观察 RFP 时用对应波段的观察眼镜（如 LUV-50A），挡掉激发光、只让荧光通过，暗背景下对比更强；
- 控制环境光：关灯或移入暗处，环境光会显著削弱微弱荧光灶的可见度；
- 角度与距离：光源斜射，避免正反射；脏器表面湿润时反光强，可稍微调整角度或吸去多余液体；
- 拍照留证：固定光源位置、距离与相机参数，不同组别用同一套设置，便于定量比较；
- 注意自发荧光：肠道内容物、毛发、某些饲料成分有自发荧光，解剖时清理干净，避免误判。
常见问题
RFP 和 GFP 哪个更适合活体观察？
红色荧光穿透组织的能力略强、受自发荧光干扰小，适合脏器表面成像；GFP 亮度高、表达强，适合细胞与浅表组织。按实验体系选。
需要麻醉或处死动物吗？
终末观察通常取器官后成像；若要做动态跟踪，可在麻醉状态下做体表成像，但穿透深度有限。
荧光灶很小会不会看不到？
与表达强度、光源功率、观察距离都有关。适当靠近、延长暗适应时间、提高光源档位都有帮助。
能定量吗？
可以做半定量：固定拍摄参数后统计荧光面积或积分光密度，与切片计数结果相互印证。
相关产品与延伸阅读
上海路阳仪器有限公司. 《激发光源用于小鼠肺部癌细胞的荧光观察》[EB/OL]. 上海路阳仪器有限公司, 2024-06-04. https://www.luyor.net/paper/49.html.
